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PCR实验室污染与防控

    在众多的生物实验室中,分子生物学检测方法如PCR因其检测灵敏度高、准确度好、操作方便、快速等优势已经被广泛应用。不过正是由于它的高灵敏性,实验室中极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,所以对环境中污染源的防控也极为重要。一旦出现实验室环境污染,比如样本之间交叉污染、试剂污染、仪器污染、阳性对照污染、PCR扩增产物污染、气溶胶污染等,其中气溶胶污染是一个非常重要而被忽视的污染源。实验室出现气溶胶污染,需要较长的时间进行根除。

一、污染原因

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二、PCR污染的监测

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试剂污染

重新更换新拆封的合格试剂检测,

如果阴性对照仍然有扩增曲线,初步判定为实验室污染。

    实验室污染

监控对象:实验室内的仪器设备、空气、物体表面

监测方法:1.1水样验证:每个实验区放置10ml单蒸水水(敞口),1个小时后,取样200ul。

1.2物体表面擦拭取样:用棉拭子蘸取生理盐水,在实验室台面(尤其是四周死角)、仪器表面和内孔涂抹取样后放入约0.5mL生理盐水中取样。


三、解决PCR实验室污染的方法


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___    (1)开窗通风:如在短时间内要消除实验室污染,开窗通风促进实验室内空气流通,使停留在室内的核酸排放到室外。 __

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___    (2)紫外灯照射:将实验室内生物安全柜内物品平铺,打开离心机内盖,然后将紫外等打开照射12-24小时,通风12小时以上 __

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___    (3)消毒液降解核酸:及时用1%-2%的次氯酸钠擦拭操作台面和仪器,用10%次氯酸钠浸泡试验器具,同时用10%次氯酸钠洗拖布擦拭地面。 __

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___    (4)高压:试验耗材、工作衣进行121℃30分钟高压 __

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___    (5)使用商品化核酸去除剂喷洒室内降解核酸。 __

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___    (6)阳性污染特别严重,可以采取高锰酸钾甲醛(2:1)过夜熏蒸实验室。 __

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四、PCR实验室如何预防污染

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___    1、合理的实验室分区 __

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___    2、实验操作流程: __

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___    (1)样品制备区进行样品处理,核酸提取; __

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___    (2)配液区配置反应体系:酶混合液和PCR反应液混合,分装至PCR反应管 __

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___    (3)样品制备区加样:样核酸和阴阳性对照加至反应液中; __

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___    (4)PCR扩增区上机扩增检测。务必保持单向操作流程,避免各区实验室污染 __

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___    3、各个实验区内试验用品专区专用 __

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___    配液区是最洁净的试验区域样品制备区的洁净度稍差, PCR扩增区是最易被污染的区域,各区之间试验物品专区专用,避免因交叉使用造成实验室污染。 __

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___             4、试验操作要规范 __

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___    (1)正确使用移液枪,保证试剂配比计量正确,同时避免液体吸入移液枪口造成污染 __

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___    (2)实验的过程中应勤换手套,在进出不同区域或进行模板操作后,都应及时更换手套。 __

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___    (3)试剂盒各组分在打开之前应先做瞬时离心(约10s),将管壁及管盖上的液体甩至管底部,从而减少污染手套或加样器的机会。开管动作要轻,以防管内液体溅出或形成气溶胶,造成污染。

    (4)样本量较多时,应将反应液预混,再分装至PCR反应管,最后添加核酸模板,以减少单个添加操作繁琐造成的污染。

    (5)每次试验必须设定阴性对照和阳性对照,读取结果时,在保证阴阳性对照均成立的情况下,判读样本结果才有效。

    (6)实验结束后PCR反应管严禁打开,及时放置次氯酸钠消毒液中浸泡。

    5、做好日常消毒工作

    每日工作完成后,及时处理实验室内废弃物,消毒液擦拭操作台面和仪器,拖布蘸取消毒液擦拭地面,开窗同风10分钟以上。

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